产品货号：
BTN16-17400
中文名称：
牛诺如病毒RT-LAMP检测试剂盒
英文名称：
Bovine Norovirus(BoNoV) RT-LAMP Kit
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本公司根据独有的双染料RT-LMAP技术，开发了简单快捷的牛诺如病毒RT-LAMP检测试剂盒。
牛诺如病毒(Bovine Noroviruses，BNoV)是杯状病毒科、诺如病毒属的单股正链RNA病毒，能够引起犊牛腹泻，各年龄段犊牛均易感。牛感染诺如病毒后会出现腹泻、厌食、吸收不良，精神不振的临床症状，腹泻常持续3-4 d，3周龄的犊牛比新生犊牛发病严重。目前还没有合适的细胞类型用于培养BNoV，因此快速灵敏的分子检测具有重要的意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品RNA的制备
二、RT-LAMP反应(20μL体系)
三、结果分析
相关搜索：牛诺如病毒RT-LAMP检测试剂盒，Bovine Norovirus(BoNoV) RT-LAMP Kit
牛诺如病毒(Bovine Noroviruses，BNoV)是杯状病毒科、诺如病毒属的单股正链RNA病毒，能够引起犊牛腹泻，各年龄段犊牛均易感。牛感染诺如病毒后会出现腹泻、厌食、吸收不良，精神不振的临床症状，腹泻常持续3-4 d，3周龄的犊牛比新生犊牛发病严重。目前还没有合适的细胞类型用于培养BNoV，因此快速灵敏的分子检测具有重要的意义。
- 即开即用，用户只需要提供病毒RNA样品。
- 恒温扩增，可以不需要荧光PCR等贵重仪器。
- 含可见光和荧光染料，既可以用金属浴和水浴扩增用可见光肉眼判断结果，也可用荧光PCR仪进行实时荧光检测。
- 检测灵敏性一般比RT-PCR高10倍以上，分析灵敏度可以达到100拷贝/反应左右。
- 特异性高，根据牛诺如病毒RNA保守序列设计4条特异引物，不会跟其他生物的RNA发生交叉反应。
- 一般30分钟内出结果，比RT-PCR快。
- 提供无传染性的阳性对照，便于分析实验结果。
- 本产品只能用于定性分析，不推荐用于定量分析。
- 上样量大，对20μL的反应体系，最大样品加样量高达到13μL。
- 内含的dUTP-UNG可防交叉污染。
- 本产品足够50次20μL体系的染料法荧光及可视化RT-LAMP扩增。
- 只能用于科研。
| 组分 | 规格 |
| 双染料RT-LAMP MagicMix | 300μL |
| 20×牛诺如病毒RT-LAMP引物混合液 | 200μL |
| 牛诺如病毒RT-LAMP阳性对照(1×107拷贝/μL) | 50μL |
| PCR级石蜡油 | 300μL |
| 超纯水 | 1mL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、样品RNA的制备
- 用自选方法纯化样品RNA，本试剂盒跟市场上大多数RNA提取试剂盒兼容，包括本公司的免提取的核酸释放剂。
- 如果有N个样品，则需要做N+2个样品制备，包括一个样品制备阳性对照(PC)和一个样品制备阴性对照(NC)。PC用10μL本试剂盒提供的阳性对照(1×107拷贝/μL)稀释1000倍后(1×104拷贝/μL)加一定量的水作为核酸提取的起始样品，NC用水替代。
二、RT-LAMP反应(20μL体系)
- 反应设置：如果有N+2个RNA纯化样品，则最好设置N+4个RT-LAMP扩增，增加RT-LAMP阴性对照和RT-LAMP阳性对照各1个。在N+4个PCR管中加入下列成分：
成分 N+2个样品管 RT-LAMP阴性对照 RT-LAMP阳性对照 双染料RT-LAMP MagicMix 各6μL 6μL 6μL 20×牛诺如病毒RT-LAMP引物混合液 各1μL 1μL 1μL N+2个样品RNA 各13μL - - 超纯水 - 13μL - 第2步所得的阳性对照的1000倍稀释液 - - 13μL - 如果使用金属浴或水浴保温，没有热盖，建议在每个反应管中加入本试剂盒提供的30～50μL石蜡油，否则保温期间反应体系的水分会蒸发到管盖下方凝集，反应体积变化，会严重影响反应效率，增加假阳性率。最后置于65℃保温60分钟进行扩增。
- 如果使用常规PCR仪进行RT-LAMP反应，设置程序时必须打开热盖，设置成65℃保温60分钟进行扩增。
- 如果使用荧光定量PCR仪，则设置60次循环，每次65℃保温1分钟，采集SYBR通道的荧光信号。
三、结果分析
- 电泳分析：由于取样时非常容易产生气溶胶污染，污染实验环境并且非常难清除污染，所以强烈建议不要采取此方法分析实验结果。即使使用，也要在不同的房间，使用不同的移液枪操作。具体做法是取10μL RT-LAMP扩增产物跟自备上样液混合后进行2%琼脂糖凝胶电泳。RT-LAMP阳性对照必须有正常RT-LAMP条带(200bp左右的梯形扩增产物)，RT-LAMP阴性结果必须无条带，否则实验结果无效。如果RT-LAMP阳性对照和阴性对照结果正常，再分析待测样品。典型的电泳结果见下表，奇数样为阴性结果，偶数样为阳性结果：
- 可将光(肉眼)分析：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈蓝色，样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将呈淡蓝色或无色，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的颜色接近扩增阳性对照管则说明样品为阳性，如果接近阴性对照则说明待测样品为阴性。典型的可将光检测结果见左图(9为阴性，10为阳性)。
- 荧光分析(仅限于用qPCR仪进行反应的场景)：样品制备阳性对照和RT-LAMP阳性对照的反应液将有标准的S扩增曲线，样品制备阴性对照和RT-LAMP阴性对照的反应液将没呈平线，没有S曲线，否则提取实验或扩增实验无效。如果阳性和阴性对照结果正常，则实验有效，可以分析样品的情况。样品管的荧光曲线为S型，则说明样品为阳性，如果为平线则说明待测样品为阴性。典型的荧光检测结果见下图。左边为阳性，右边为阴性。
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